由于目的不同而有不同的培養方法，可分為以下幾大類：

（1）與空氣隔絕或盡量少接觸空氣的培養法：在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養基，通過煮沸把溶解的空氣趕出后，立即冷卻進行細菌接種。由于發酵而產生H2和CO2時，就可進一步確認是厭氧細菌。另外，把瓊脂培養基加入普通試管約10厘米高度進行穿刺培養，或移植于液體培養基和固體斜面培養基上以后，再加一層液體石臘或礦物油，用這些方法可防止與空氣接觸。

（2）除掉空氣的方法：把微生物裝入耐壓容器中進行真空培養，或充滿二氧化碳、氫氣、氮氣、氬氣等。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時，可用置換后飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣

（3）去氧的方法：使用堿性鄰苯 三酚（pyrogallol） 、黃磷、金屬鉻和稀硫酸進行化學除氧，或使用好氧細菌及發芽的種子，使通過呼吸而消耗掉氧氣。

（4）在培養基中加入還原劑（如0.1%的巰基乙酸鈉鹽，0.01%的硫化鈉等）。以上各種方法進行適當組合就能進一步確認厭氧細菌。為了確定厭氧性，可在堿性條件下加入葡萄糖并加熱，與配制的還原型次甲藍（美藍）溶液一起加入，保持脫色狀態即可。